Підбір умов для спектрофотометричного визначення активності параоксонази з 4-нітрофенілацетатом у плазмі та печінці мишей

Abstract

Параоксонази - це група ферментів ссавців з арилдиалкілфосфатазною активністю, і найбільш вивченою з праоксоназ є параоксоназа 1 (PON 1). Параоксоназа 1 вперше була описана у 1940-х роках як фермент, виявлений у тканинах ссавців, здатний гідролізувати фосфорорганічні пестициди. Однак останні дослідження показали, що PON 1 також відіграє захисну роль при захворюваннях, пов’язаних із запаленням і оксидативним стресом та виявляє протизапальні, антиоксидантні, антиатерогенні, антидіабетичні, антимікробні та детоксикаційні властивості. Зокрема, PON 1 важлива для захисту від судинних захворювань, оскільки метаболізує окислені ліпіди у складі ліпопротеїдних комплексів крові. Деякі дослідження показують, що знижена активність PON 1 пов’язана з ризиком розвитку серцево-судинних захворювань, а також ожиріння, метаболічного синдрому та раку. Тому визначення активності параоксонази можна вважати важливим біомаркером у діагностиці вищевказаних захворювань. У цій роботі ми оптимізували умови спектрофотометричного визначення активності параоксанази в крові та печінці мишей. Адаптовано протокол для визначення арилестеразної активності PON1 з використанням нітрофенілацетату як субстрату. Концентрація нітрофенілацетату 3,2 ммоль/л була обрана для визначення параоксонази в тканинах мишей. Питома активність PON 1 у цих тканинах була різною - 210±17 мОд/мг у плазмі крові та 66,5±8,5 мОд/мг у супернатанті печінки. Рекомендований об'єм надосадової рідини для визначення PON 1 становить 5 мкл для плазми та 10 мкл для печінки в реакційній суміші загальним об'ємом 1,25 мл.